乙肝病毒主要是通過血液和體液傳播，常因輸注含有該病毒的血與血制品，或使用被該病毒污染的注射器、針頭、針灸用針等方式傳染。業已證明乙肝病毒表面抗原在尿液、唾液、膽汁、乳汁、汗液、羊水、月經、陰道分泌物、精液、胸水、腹水中均可檢出，因而密切生活接觸、性接觸、母嬰垂直傳播等也是重要的傳染途徑。關于經口感染問題，有人認為病毒入口后，必須通過消化道粘膜破潰面，如口腔潰瘍、胃和十二指腸潰瘍、食管炎等病灶進入血行而發生感染，在消化道功能正常的情況下，經口感染乙肝病毒的機會遠較甲肝為低。實驗研究觀察，尚未證實乙肝患者的糞便具有傳播作用。
預防乙肝重點是防止通過血液和體液的傳播，各種醫療和預防注射 ，應實行一人一針一管，對帶血清污染物，應嚴格消毒處理。透析病房應加強衛生管理。血制品應嚴格檢查，如乙肝病毒HBV標志陽性，不得出售和應用。
乙肝表面抗原 (HBsAg)攜帶者應定期隨訪觀察，均不得獻血。易感人群預防接種乙肝疫苗是預防乙肝的根本措施。我國生產的乙肝血源性疫苗已較成熟，免疫效果和安全性較好，對嬰幼兒的預防及阻斷母嬰垂直傳播獲得了滿意效果。可于新生兒出生后24小時、1個月、6個月各肌肉注射一次，每次30微克，其后抗HBs陽轉率達96%。乙肝疫苗與乙型肝炎免疫球蛋白聯合應用，對嬰兒的保護率可提高到95%以上。